SDS PAGE و پروتکل ساخت ژل آن
سایت ویستاژن در این مقاله به توضیح روش SDS PAGE و SDS-PAGE protocol پرداخته است.
SDS PAGE چیست؟
یکی از روش‌های بررسی بیان پروتئین، استفاده از روش الکتروفورز پروتئین می‌باشد. الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید جهت تعیین وزن مولکول پروتئین‌ها، روشی رایج و مهم در آزمایشگاه‌های تحقیقاتی می‌باشد. این روش ضمن ساده بودن به مقدار کمی نمونه برای انجام آزمایش نیاز دارد و دارای قدرت تفکیک مناسب برای شناسایی و تعیین خلوص پروتئین‌هاست. در این مقاله به توضیح الکتروفورز پروتئین از روش SDS-PAGE (الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید در حضور سدیم دو دسیل سولفات) پرداخته شده است. ژل SDS-PAGE در یک الکتروفورز، در دو قسمت ژل جداکننده [1] و متراکم کننده[2] اجرا می‌شود. ژل متراکم کننده با آکریل آمید 5% در بالای ژل جداکننده (پس از انجماد) قرار می‌گیرد و شانه در ژل متراکم کننده قرار می‌گیرد.
طرز تهیه ژل پلی آکریلامید
جدول 1) درصد آکریل آماید مورد استفاده نسبت به وزن مولکولی پروتئین
| محدوده وزن مولکولی | درصد آکریل آماید |
| 50 kDa – 500 kDa | 7% |
| 20 kDa – 300 kDa | 10% |
| 10 kDa – 200 kDa | 12% |
| 3 kDa – 100 kDa | 15% |
- درصد آکریل آماید ژل به سایز نمونه پروتئین بستگی دارد (جزئیات در جدول 1 نشان داده‌شده است)
- حجم ژل متراکم کننده و جدا کننده بر حسب ضخامت کاست متفاوت است (جدول 2).
طرز تهیه ژل پلی آکریلامید
جدول 2 حجم ژل متراکم کننده و جداکننده بر حسب ضخامت کاست
|
|
حجم ژل متراکم کننده | ضخامت ژل |
| 4ml | 2ml | 0.75mm |
| 6ml | 3ml | 1.0mm |
| 8ml | 4ml | 1.5mm |
- برای تهیه ml ۵ ژل متراکم کننده مقادیر به شرح جدول 3 می‌باشد.
جدول 3) مقادیر لازم برای تهیه ۵ میلی‌لیتر ژل متراکم کننده
| 2.975 ml | H2O |
| 0.5 M Tris-HCl, pH 6.8 | 1.25 ml |
| 10% (w/v) SDS | 0.05 ml |
| Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) | 0.67 ml |
| 10% (w/v) ammonium persulfate (AP) | 0.05 ml |
| TEMED | 0.005 ml |
- برای تهیه ml ۱۰ ژل جداکننده مقادیر به شرح جدول 4 می‌باشد.
جدول 4) مقادیر لازم برای تهیه ۱۰ میلی‌لیتر ژل جداکننده با درصدهای متفاوت از آکریل آماید
| درصد آکریل آماید | 6% | 8% | 10% | 12% | 15% |
| H2O | 5.2ml | 4.6ml | 3.8ml | 3.2ml | 2.2ml |
| Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) | 2ml | 2.6ml | 3.4ml | 4ml | 5ml |
| 1.5M Tris(pH=8.8) | 2.6ml | 2.6ml | 2.6ml | 2.6ml | 2.6ml |
| 10% (w/v)SDS | 0.1ml | 0.1ml | 0.1ml | 0.1ml | 0.1ml |
| 10% (w/v) ammonium persulfate (AP) | 100μl | 100μl | 100μl | 100μl | 100μl |
| TEMED | 10μl | 10μl | 10μl | 10μl | 10μl |
- AP و TEMED قبل از شروع کار و آخرین ترکیباتی هستند که باید اضافه شوند.
[1]-Separating gel or Resolving gel
[2]-Stacking gel
👍بسیارعالی
ممنون
👌🏻👌🏻SDS PAGE بسیار پرکاربرده در آزمایشگاه
ممنون
اطلاعات خوبی در مورد طرز تهیه ژل پلی آکریلامید بود ممنون
سلام دوست عزیز. ممنون از همراهی شما
👍👍👍👍👌👌👌👌👌
درود بر شما
مفید و بسیارکاربردی👍👍👍👍👌👌👌👌👌
ممنون از همراهی شما
بسیار عالی و مفید✊👍👌چقدر دنبال پروتکل SDS PAGE بودم
سلام دوست عزیزم.خوشحالیم که براتون مفید بود
👏👏👏👍
مثل همیشه مطالبتون بی نظیره، ممنون
سپاس دوست گرامی